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本试剂盒是一种基于化学而非去污剂方法的高产跨膜蛋白提取试剂盒，适用于从昆虫组织或培养细胞中温和、高效地抽提膜/跨膜蛋白和膜蛋白复合物。用本试剂盒抽提和富集到的蛋白包括从分子量很小到很大的蛋白，单次跨膜至7次以上的蛋白，甚至一些大的蛋白复合物。提取过程简单方便，可在1小时内完成。提取的膜蛋白不仅纯度高，保持天然活性，而且绝少交叉污染。提取的蛋白可用于Western Blotting、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、免疫共沉淀、酶活性测定等蛋白研究。

• 使用方便，从昆虫细胞，组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。
  
• 将蛋白提取的时间缩短至30分钟～1小时。
  
• 含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
  
• 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
  
• 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含7种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

• 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
  
• 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
  
• 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
  
• 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。

• 每500μL抽提液A中加入2μL蛋白酶抑制剂混合物，充分混匀后置冰上备用。
  
• 取适量昆虫组织样本剪碎，置于研钵中用液氮研磨。（没有液氮也可直接置冰上研磨即可）
  注：
  ● 样本数量根据实验情况调整，每次的裂解液用量并不是一定的，请根据实际情况调整。
  ● 由于膜蛋白含量较少，需要较多的组织或细胞才能保证得率。
  ● 用液氮研磨的方法更佳。
  
• 研磨后加入500μL提取液，混匀后于一个预冷的干净离心管中在冰上静置2～3小时。
  
• 将提取液在低温下12000×g离心5分钟，取上清。
  
• 在上清中加入10μL抽提液B，充分混匀。
  
• 在37℃水浴10分钟。
  
• 在37℃ 1000×g离心3分钟。
  注：必需保证在37℃左右下离心，至少确保30℃以上。无可控温的离心机时，用常温的离心机在室温离心即可，适当缩短离心时间至2～3分钟。
  
• 此时溶液会分为2层，移除上层，小心吸取下层管底部大约50μL液体。
  
• 用50～150μL冰冷试剂C稀释该溶液，即得跨膜蛋白样品。将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
  注：
  ● 进行下游实验时，可用试剂C分别稀释水相与有机相，取一个水相样品同时进行实验分析。
  ● 用BCA法进行蛋白定量。蛋白样品-80℃存放一年没问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。